杜仲平压片指纹图谱分析-舒美KQ-300DE的使用！！

杜仲平压片是由杜仲叶经水煎煮、提取加工制 成的片剂，能降血压，强筋健骨；适用于高血压、 腰膝酸痛、筋骨痿软等症。现代研究表明，杜仲叶 中的有效活性成分主要包括以绿原酸为代表的苯丙 素类、芦丁为代表的黄酮类等化学成分。绿原酸 是杜仲叶的主要活性成分，具有利胆、抗菌、抗病 毒、降压等多种药理作用。芦丁具有降血压、降血 脂、抗氧化以及舒张血管等广泛的生物学活性 。 杜仲平压片的生产厂家较多，为保证该药物治疗效 果的稳定，需对该制剂质量进行严格控制。

1 材料

1.1 仪器

Agilent 1260 高效液相色谱仪（配制 DAD 型检测器），美国 Agilent 公司；AUW-220D 电子天 平，日本岛津公司；KQ-300DE超声清洗器，昆山舒美超声仪器有限公司。

1.2 药物及试剂

绿原酸（批号：110753-201716，纯 度：99.3%）、芦丁对照品（批号：100080-201408， 纯度：92.8%），中国食品药品检定研究院；新绿原 酸（批号：18032403，纯度：99.07%），成都曼思特 生物科技有限公司；甲醇、乙腈为色谱纯，德国 MERCK公司；其余试剂、试药均为分析纯，水为纯 水。17批杜仲平压片样品来源，见表1。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Thermo Hypersil Gold-C18柱 （4.6 mm × 250 mm，5 μm）；流动相：乙腈（A）-0.1% 磷酸溶液（B）；梯度洗脱：0～10 min：5%→10%A， 10～20 min： 10% →16% A， 20～30 min： 16% A， 30～35 min： 16% →25% A， 35～45 min： 25% A， 45～45.1 min：25%→5%A，45.1～50 min：5%A；流 速：1.0 mL·min- 1 ；柱温：30 ℃；检测波长：354 nm；进样量：10 μL。

2.2 溶液制备

2.2.1 供试品溶液

取杜仲平压片样品适量，除去薄 膜衣或糖衣，研细，取粉末约1 g，精密称定，置锥 形瓶中，精密加入50%甲醇50 mL，称定质量，超声30 min，放冷，再次称定质量，用 50%甲醇补足减 失的质量，摇匀，滤过，即得。

2.2.2 混合对照品溶液

分别精密称取新绿原酸、绿 原酸和芦丁对照品适量，用 50%甲醇定容至刻度， 制成浓度分别为38.21、255.61、19.72 μg · mL-1 的对 照品储备溶液。

2.2.3 阴性样品溶液

按杜仲平压片处方工艺，制成 只含辅料的阴性样品。取阴性样品适量，研细，按 2.2.1 项下方法制成阴性样品溶液。

2.3 方法学考察

2.3.1 精密度试验

分别精密吸取同一供试品溶液 （批号：171510）10 μL，按 2.1 项下色谱条件，连续 进样6次，记录色谱图。以绿原酸为参照峰（S），计 算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积。结果显 示，相对保留时间相对标准偏差（RSD）值均小于 2%，相对峰面积RSD值均小于3%，表明仪器精密度 良好。

2.3.2 稳定性试验

分别精密吸取同一供试品溶液 （批号：171510）10 μL，按 2.1 项下的色谱条件，分 别在0、2、6、10、18、24 h进样，记录色谱图。以 绿原酸为参照峰（S），计算各共有峰的相对保留时间 和相对峰面积。结果显示，相对保留时间 RSD 值均 小于 1%，相对峰面积 RSD 值均小于 3%，表明供试 品在24 h内稳定性良好。

2.3.3 重复性试验

取同一批杜仲平压片样品（批 号：171510），依照2.2.1项下方法平行制备6份供试 品溶液，按2.1项下的色谱条件进行分析，记录色谱图。以绿原酸为参照峰（S），计算各共有峰的相对保 留时间和相对峰面积。结果显示，相对保留时间 RSD 值均小于 2%，相对峰面积 RSD 值均小于 3%， 表明该方法重复性良好。


3 讨论

在比较了不同色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）、Waters Sunfire C18 （250 mm×4.6 mm，5 μm）、Thermo Hypersil Gold-C18 （250 mm×4.6 mm，5 μm），不同梯度洗脱体系（乙腈水，乙腈-0.5%乙酸溶液，乙腈-0.1%磷酸溶液、甲 醇-0.1%磷酸溶液不同波长（采用DAD检测器 对供试品溶液进行紫外全波长扫描） 对指纹图谱测 定的影响的基础上，选择了本实验方案，实验结果 显示采用Thermo Hypersil Gold-C18色谱柱、以乙腈0.1%磷酸为流动相梯度洗脱、在波长 354 nm 条件 下，色谱峰信息较为丰富，各特征峰对称性良好， 吸收较大、分离效果为最好，故最终确定2.1项下的 色谱条件作为杜仲平压片样品指纹图谱测定的色谱 条件。