舒美

服务热线:021-58201756
13621695486

他们都在找: 昆山舒美KQ-700E超声波清洗
当前位置主页 > 技术支持 >

和刺激诱导大鼠的抗抑郁作用

导读:研究吴茱萸次碱对慢性不可预见性温和刺激(CUMS)诱导的大鼠抑郁模型的作用及其机制。


返回列表 来源:未知 发布日期:2019-11-29 09:12【

抑郁症是一种以情绪持续低落超过两周、思维 和行为发生改变为主要特征,严重影响正常生活的 精神疾病。虽然现代医学对抑郁症有广泛深入的 研究,但其具体的病因和发病机制仍不明确。近年 来有学者提出了“神经营养假说”,认为抑郁症的发 生与脑源性神经营养因子(BDNF)及其信号通路 密切相关。当前抗抑郁的药物大部分是合成药, 普遍存在起效慢、有效率不高、价格昂贵、不良反 应多等缺点,制约了临床使用。因此安全、低毒的 天然药物成了抗抑郁药研究领域的研究热点。

1 材料

1.1 实验动物

Sprague-Dawley(SD)大鼠,清洁级,雄性, 50 只,180~220 g,由浙江省实验动物中心提供, 合格证号为 SCXK(浙)2014-0001。

1.2 药物与试剂

吴茱萸次碱,质量分数为 98%,购自杭州东岸生 物医药有限公司;氟西汀片,规格 10 mg/片,产品批 号 171201,购自常州四药制药有限公司;羟甲基纤维 素钠,产品批号 950420,购自国药集团化学试剂有限 公司;5-羟色胺(5-HT)和去甲肾上腺素(NA)酶联 免疫吸附测定试剂盒,产品批号 AK0017NOV25019, 购自 Elabscience 公司;PCR 引物购自上海捷瑞生物 工程有限公司;qPCR 逆转录试剂盒,产品批号 RR036A,购自宝生物工程(大连)有限公司。

1.3 仪器

分析天平由上海民侨精密仪器公司提供;酶标 仪由 Thermo Fisher 提供;恒温水浴超声仪由昆山超声仪有限公司提供。

2 方法

2.1 分组及给药

实验开始前大鼠在实验室适应性饲养一周,以适应环境。适应性饲养结束后大鼠进行旷场实验 (open-field test),根据得分将 50 只大鼠随机分为 5 组:对照组、模型组(0.5% CMC-Na 溶液)、吴茱 萸次碱低剂量组(10 mg/kg)、吴茱萸次碱高剂量组 (20 mg/kg)、氟西汀组(1 mg/kg)。吴茱萸次碱 的剂量是通过预实验确定的;氟西汀剂量根据人的 剂量换算成大鼠的剂量,文献显示一般人的剂量是 20 mg/d(按 70 kg/人,200 g/鼠),人鼠换算系数为 0.018,算得鼠的剂量为 1.8 mg/kg,前期按这个剂 量做了预实验,发现连续给药 2~4 周后鼠的耐受性 较差,故调整为 1 mg/kg 给药。除对照组外,模型 组及各给药组于造模的第 15 天开始,每天一次 ig 给药,完成后 1 h,继续进行慢性不可预见性刺激抑 郁造模刺激,连续 14 d 直至实验结束。室温(22± 2)℃,大鼠自由摄食饮水,光照节律为 12 h(8:00~ 20:00)。

2.2 大鼠慢性不可预见性刺激抑郁模型的建立

参照文献的方法加以改进,建立大鼠抑郁模 型:大鼠在 28 d 实验期内接受 7 种不同的刺激,分 别为:禁食(24 h),禁水(24 h),夹尾(1 min), 鼠笼摇晃(5 min),潮湿饲养(12 h),冰水游泳(5 min), 昼夜颠倒。每天一种刺激,同种刺激不连续出现。

2.3 体质量检测

分别于造模第 1、14、28 天称取大鼠体质量。

2.4 糖水偏好实验

糖水消耗实验在模型组造模两周后(第 14 天) 和给药两周后(第 28 天)进行。实验开始前先训练 大鼠饮用 1%糖水 24 h,然后再给予蒸馏水 24 h, 训练期间正常饮食。训练结束后禁食禁水 12 h,同 时给予大鼠 1%糖水一瓶和蒸馏水一瓶,24 h 后称 量记录糖水消耗量和蒸馏水消耗量。 糖水偏好度=糖水消耗量/(糖水消耗量+蒸馏水消 耗量)

2.5 旷场实验旷场

实验在模型组造模两周后(第 14 天)和给 药两周后(第 28 天)进行。实验室旷场箱为高 100 cm, 宽 100 cm,高 40 cm 的木质箱,底面为黑色,四周 为白色,通过 Anymaze 视频追踪软件将底面划分为 25 个小方格。实验进行时室内保持安静,将大鼠缓 慢放至中央格,观察并记录 5 min 内大鼠穿越的格 数和中央格停留时间。每只大鼠实验过后将木箱底 部清理干净,并用酒精棉擦拭底部,以保证下只大 鼠实验时不受粪便气味等因素的影响。

3 结果

3.1 吴茱萸次碱对大鼠体质量的影响

体质量变化能够反映抑郁模型建立是否成功。 第 14 天应激刺激后,对照组大鼠体质量增长较快, 与模型组相比有显著性差异(P<0.05),表明建模 成功。与模型组比较,在第 28 天,氟西汀组和吴茱 萸次碱高低剂量组均能显著抑制大鼠体质量下降 (P<0.05),吴茱萸次碱高剂量组与氟西汀组没有显 著性差异,说明吴茱萸次碱能够改善抑郁大鼠的食 欲,增加进食量,保持体质量增长,改善抑郁症状。

3.2 吴茱萸次碱对大鼠糖水偏好度的影响

与对照组比较,在第 14 天,模型组大鼠的糖水 偏好度明显降低(P<0.05)。与模型组比较,在第28 天,氟西汀组和吴茱萸次碱高剂量组大鼠的糖水 偏好度明显增加(P<0.05),吴茱萸次碱高剂量组 与氟西汀组没有显著性差异。

3.3 吴茱萸次碱对大鼠在旷场实验中行为的影响

与对照组比较,在第 14 天,模型组大鼠穿越格 数和中央格停留时间明显减少(P<0.05)。与模型 组比较,在第 28 天,氟西汀组和吴茱萸次碱高剂量 组大鼠穿越格数和中央格停留时间明显增加(P< 0.05),吴茱萸次碱高剂量组与氟西汀组没有显著性 差异。

4 讨论

昆山舒美认为目前,抑郁症模型可以分为环境刺激模型、社 会刺激模型、药物诱导模型、转基因模型、手术制 备模型和产后抑郁模型 6 大类。本研究所选取的模型就属于环境刺激模型,是抑郁症的经典慢性模型 之一,利用长期的相对温和的不可预测的人为刺激 使动物产生抑郁样行为,其病因和病理机制接近于 人类抑郁症,目前已经被广泛接受并运用于抗抑郁 药物研究。本实验通过检测大鼠体质量、蔗糖 偏爱度和旷场实验等,判断慢性应激抑郁模型建立 成功与否,观察吴茱萸次碱对大鼠抑郁行为的影响。 结果表明吴茱萸次碱能明显改善大鼠抑郁样行为, 高剂量(20 mg/kg)效果较好,与阳性药氟西汀的作用相当。



 


免责声明:文章仅供学习和交流,如涉及作品版权问题需要我方删除,请联系我们,我们会在第一时间进行处理。