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缓解疲劳类的20种保健品非法添加物

导读:建立串联式固相萃取–超高效液相色谱–三重四极杆质谱法(series solid phase extraction–ultraperformance liquid chromatography-triple quadrupole tandem mass spectrometry, SPE-UPLC-MS/MS)同时测定保健品中 20 种改


返回列表 来源:未知 发布日期:2019-12-02 08:59【

1 引 言

随着现代社会生活压力的逐渐增大, 越来越多人面 临性欲减弱、易疲劳的困扰, 因此, 改善阳虚、缓解疲劳 类保健食品及中成药的市场需求日益增长。然而, 一些不 法商家为了吸引消费者以牟取暴利, 在改善阳虚、缓解疲 劳的保健食品及中成药中随意添加短期内见效快、副作用 大的西药, 而且非法添加的药物剂量随意。消费者长 期、超量服用含有壮阳或缓解疲劳类药物的保健食品或中成药, 会引起毒性反应, 严重甚至危及生命。

2 材料与方法

2.1 材料、仪器与试剂

市售玛卡含片样品 A 和 B。 Waters UPLC-Xevo TQ 超高效液相色谱-三重四极杆 质谱联用仪(电喷雾离子源 ESI 和 Masslynx 4.1 工作站); KQ-300 超声波清洗仪器(昆山舒美公司); MS-TS 分析天 平(瑞士梅特勒-托利多公司); Milli-Q 超纯水器(默克密理 博公司); MS3 涡旋混合器(德国 IKA 公司); C18 固相萃取 柱、SAX 固相萃取柱、WCX 固相萃取柱(60 mg/3mL) (上海安谱公司)。 对照品伪伐地那非(CAS: 224788-34-5)、羟基豪莫西地 那非(CAS: 139755-85-4)、豪莫西地那非(CAS: 642928-07-2)、 硫代艾地那非 (CAS: 856190-47-1) 、那红地那非 (CAS: 949091-38-7)、那莫西地那非(CAS: 371959-09-0)、盐酸育亨 宾(CAS: 65-19-0)、氨基他达那非(CAS: 385769-84-6)、红地那 非(CAS: 831217-01-7)、西地那非(CAS: 139755-83-2)、伐地那 非(CAS: 224789-15-5)、甲磺酸酚妥拉明(CAS: 65-28-1)、他达 那非(CAS: 171596-29-5)、巯基西地那非(CAS: 479073-79-5)、 去乙基伐地那非(CAS: 448184-46-1)、N-去甲基西地那非(CAS: 139755-82-1)、二甲基西地那非(CAS: 1416130-63-6)、格列齐 特 (CAS: 21187-98-4) 、二乙氨基前他达拉非 (CAS: 1588526-67-3)、羟基伐地那非(CAS: 224785-98-2)(纯度均大于 98%, 德国DR.E 公司); 甲醇、甲酸、乙腈(色谱纯, 德国Merck 公司)。

2.2 实验方法

2.2.1 对照品溶液配制

分别称取伪伐地那非、羟基豪莫西地那非、豪莫西地 那非、硫代艾地那非、那红地那非、那莫西地那非、盐酸 育亨宾、氨基他达拉非、红地那非、西地那非、伐地那非、他达那非、巯基西地那非、去乙基伐地那非、N–去甲基西 地那非、二甲基西地那非、格列齐特、二乙氨基前他达拉 非、羟基伐地那非和甲磺酸酚妥拉明对照品各 2.5 mg, 超 声 10 min, 分别加甲醇定容到 25 mL, 制成最终浓度为 0.1 mg/mL 的对照品溶液。

2.2.2 样品前处理

①提取 精确称取 5 g 玛卡含片 A 或 B, 碾细并过 80 目筛, 用 100 mL 甲醇:水=80:20(V:V)溶液提取 20 min, 过滤, 减压 浓缩至 5 mL。–20 ℃冰箱静置 12 h。 ②纯化 采用 C18 固相萃取柱进行样品纯化。预先用 5 mL 甲 醇和 5 mL 去离子水活化小柱, 5 mL 待分析样品以 1 滴/s 的流速过柱。用 10 mL 的去离子水和体积浓度为 95%的甲 醇溶液淋洗。最后用 20 mL 甲醇洗脱, 收集洗脱液 A。 采用 SAX 固相萃取柱进行纯化。预先用 5 mL 的去离 子水活化小柱, 洗脱液A以1 mL/min的流速过柱, 用5 mL 水和 5 mL 甲醇分别淋洗柱子, 收集洗脱液 B。再用 15 mL 含 1% HCl 的甲醇溶液洗脱, 收集洗脱液 C。 采用 WCX 固相萃取柱进行纯化。用去离子水活化 WCX 固相萃取柱, 加入上一步洗脱液 B, 依次加入 3 mL 水和 3 mL 甲醇淋洗, 弃去流出液, 最后用 3 mL 含 5%氨水 的甲醇溶液洗脱, 收集洗脱液 D。 合并 C 和 D 洗脱液, 40 ℃水浴氮气吹干, 用甲醇溶解 定容至 2 mL, 过 0.22 μm 微孔滤膜。

3 结果与分析

3.1 色谱条件优化

实验研究了甲醇、乙腈作为流动相对目标物质出峰时 间的影响。结果表明, 乙腈出峰时间较快, 也有利于快速 检测, 因此流动相采用乙腈–水体系。其次, 研究了流动相 添加易挥发的酸来提高离子化效果, 在流动相 A、B 中分 别添加 0.1%甲酸、0.1%乙酸、0.1%三氟乙酸, 结果表明, 加 0.1%甲酸和三氟乙酸, 雾化、峰形、分离度、灵敏度较好。 最后, 研究甲酸的添加量对 C18 液相柱分离效果的影 响。流动相中添加 0.01%、0.05%、0.1%、0.5%体积比的 甲酸, 发现随着甲酸浓度的增加, 20 种化合物的保留时间 减少且分辨率增大。但是当浓度增加到 0.5%以后, 效果变 化降低。因此甲酸添加量为 0.1%, 各个峰在总离子流图谱 上基本能分开且检测出。

3.2 质谱参数优化

采用 ESI 正离子模式进行一级质谱扫描, 得到各标准 品母离子峰 M。以各母离子峰作二级质谱, 得到碎片子离 子峰 D, 选取 2 个子离子峰 D1 和 D2, 分别与母离子 M 形 成离子对, 然后进行 MRM 模式检测, 并对各质谱参数进 行优化。 带*的子离子与其对应 的母离子为定量离子对。

4 结 论

建立了串联固相萃取-超高效液相色谱-三重四 极杆串联质谱法同时测定改善阳虚和/或缓解疲劳保健食 品中 20 种非法添加物的分析方法。通过对实验条件进行选 择和优化, 确定了固相萃取纯化条件、色谱条件、质谱条 件, 在 5 min 内可以完全分离鉴定 20 种非法添加物。应用 固相萃取串联法净化复杂样品, 有效减少食品基质成分的 干扰, 提高了检测灵敏度。该方法简单快捷, 结果准确可 靠, 并可节约大量溶剂, 适用于对该类保健品中非法添加 物的检测, 为监管保健食品及中成药中非法添加化学药物 提供有力的技术支持。



 


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