羌活体内外抗炎作用差异-昆山舒美KQ-400KDE使用

羌活为伞形科植物羌活 Notopterygium incisum Ting ex H. T. Chang或宽叶羌活N. forbesii H. de Boiss.的干燥根茎及根，具有祛风止痛等功效，临床多 用于外感所致头身关节疼痛、风湿痹痛等。

1 仪器与材料 

1.1 仪器 

CPA225D 电子天平（德国 Sartorius 公司）； 昆山舒美KQ-400KDE 超声波清洗仪（昆山市超声仪器有限 公司）；DFT-50A 粉碎机（温岭市林大机械有限公 司）；SHB-3A 循环水多用真空泵（郑州杜甫仪器 厂）；SB-2000 旋转蒸发器（上海爱朗仪器有限公 司）； ALPHA 2-4 LSC plus 真空冷冻干燥机（德国 Christ 公司）；5424R 冷冻离心机（德国 Eppendorf 公司）；3-18N 台式高速离心机（湖南恒诺仪器设备 有限公司）；−80 ℃冰箱（美国 Thermo Forma 公司）； DZKW-4 电热恒温水浴锅（北京中兴伟业仪器有限 公司）；HERAcell vios 160i CO2培养箱（美国Thermo Scientific 公司）；CKX53 倒置光学显微镜（日本Olympus 公司）；1300 SERIES A2 生物安全柜（美 国 Thermo Scientific 公司）；Spectramax i3x 酶标仪 （美国 Molecular Devices 公司）。 

1.2 药品与试剂 

阿司匹林肠溶片（批号 20171202，沈阳奥吉娜 药业有限公司）；生理盐水；乙醇（分析纯，北京化 工厂）；甲醇（分析纯，北京化工厂）；二甲苯（分 析纯，北京化工厂）；DMEM 培养基（美国 Corning 公司）；胎牛血清（FBS，美国 Corning 公司）；青 霉素-链霉素（PS，美国 Invitrogen 公司）；磷酸盐 缓冲液（PBS，江苏凯基生物技术股份有限公司）； 二甲基亚砜（DMSO，美国 VWR Life Science 公司）； CCK-8 试剂盒（上海东仁化学科技有限公司）；LPS （美国 Sigma 公司）；NO 检测试剂盒（碧云天生物 技术有限公司）；小鼠肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、 白细胞介素-6（IL-6）ELISA 试剂盒（美国 Proteintech 公司）。 羌活药材来源于四川蚕羌、甘肃临洮县玉林镇 条羌、甘肃漳县金钟镇大头羌。经北京中医药大学 孙志蓉教授鉴定为伞形科植物羌活 Notopterygium incisum Ting ex H. T. Chang 或宽叶羌活 N. forbesii H. de Boiss. 的干燥根茎及根。 

1.3 实验动物与细胞 

SPF 级雄性昆明种小鼠，体质量（20±2）g，购 于北京斯贝福生物技术有限公司，动物使用许可证 号 SCXK（京）2016-002。RAW 264.7 细胞购自北 京协和医学院细胞库。 

2 方法 

取羌活原药粉末 50 g，分别加入 8 倍量乙醇加 热回流提取 3 次，每次 1 h，滤过，合并滤液，回收 乙醇得到膏状物，蒸馏水溶解稀释为 1 g/mL 的浓缩 液，置于冰箱 4 ℃储存备用，用于体内实验。主要 成分绿原酸、紫花前胡苷、阿魏酸、羌活醇和异欧 前胡素的测定方法及具体含量。 取羌活原药粉末，分别精确称取 5 g，加 10 倍 量甲醇溶液加热回流提取 30 min，滤过，取续滤液 浓缩并置于真空冷冻干燥机中进行真空冷冻干燥，得冻干粉。精密称量 100 mg 羌活冻干粉，加入适 量 DMSO 溶液使其溶解完全，配制成 100 mg/mL 的母液，保存在−20 ℃备用。加药前，再以 DMEM 无血清培养基（仅含 1%青霉素-链霉素）稀释至不 同浓度（DMSO 终质量分数为 0.1%），经 0.22 μm微孔滤膜过滤除菌，即得，用于体外实验。主要成 分绿原酸、紫花前胡苷、阿魏酸、羌活醇和异欧前 胡素的测定方法及具体含量。

3 结果

二甲苯致小鼠耳肿胀急性炎症实验结果见表 1。由结果可知，与模型组比较，蚕羌和大头羌对小 鼠耳肿胀有显著的抑制作用（P＜0.05），且与阿司 匹林组比较，差异不显著；条羌对小鼠耳肿胀无显 著的抑制作用。

264.7 细胞活力的影响 羌活 对 RAW 264.7 细胞活力影响结果见图 1。由结果可 知，蚕羌、大头羌、条羌醇提物在 10～80 μg/mL 对 RAW 264.7 细胞活力无显著影响（细胞存活率＞ 95%）。因此，在后续实验中，可将待测样品的质量 浓度控制在 10～80 μg/mL。

4 讨论 

炎症是机体对于损伤性刺激做出的复杂自然性 防御反应，且能够激发免疫系统，引起血管舒张、 血液流动性增加、炎症介质释放、细胞代谢增加等。二甲苯是常用的化学致炎剂，可诱导组胺、 激肽及纤维蛋白溶解酶等炎症介质释放，进而引起 局部毛细血管通透性的增加、炎症细胞的浸润、急 性渗出性炎性水肿等。NO 是一种重要的炎症介 质，在炎症发生初期可以清除病原体为机体提供保 护措施，但过量的 NO 会与超氧阴离子（O • 2 ）反 应生成过氧化亚硝酸盐，导致局部组织损伤，促进 炎症疾病的发生。

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