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葡萄糖苷的超声波前处理分析-KQ-500DE使用

返回列表 来源:未知 发布日期:2019-12-27 09:32【

亚麻籽在我国内蒙、河北、宁夏、山西等地区被 广泛种植,因其丰富的营养成分而备受欢迎。亚麻 木酚素是亚麻籽特有的一类生理活性物质,包括开 环异落叶松树脂酚二葡萄糖苷( 简称 SDG) 、马台树 脂醇、罗汉松脂酚、落叶松树脂醇等。


1 材料与方法 


1. 1 试验材料 


1. 1. 1 原料与试剂 


亚麻籽,产自新疆且由宁夏君星坊科技有限公 司提供; SDG 标准品( 纯度≥98% ) ,北京世纪奥科 生物技术有限公司; 甲醇、乙醇、乙腈、正己烷、冰乙 酸、氢氧化钠、浓盐酸等,分析纯,国药集团化学试剂 有限公司; 甲醇,色谱纯,国药集团化学试剂有限公 司; 超纯水,实验室自制。 


1. 1. 2 仪器与设备 


Waters 1525 高效液相色谱仪,Waters 2996 可变 波长二极管阵列检测器; KQ-500DE超声波清洗器,昆山超声仪器有限公司; R - 501 旋转 蒸发器、SHB - 3 循环水真空泵,上海申顺生物科技 有限公司; AL204 电子天平,梅特勒 - 托利多仪器有 限公司; Anke TGL - 16G 台式离心机,上海安亭科 学仪器厂。 


1. 2 试验方法 


1. 2. 1 亚麻籽的预处理 


称取经除杂的亚麻籽 450. 0 g( 精确至 0. 1 g) , 将其粉碎,按料液 比 1 ∶ 5 加 入 正 己 烷,50 ℃ 搅 拌 ( 200 r/min) 6 h,抽滤、挥干溶剂、粉碎、过 20 目筛即 得脱脂亚麻籽粉,冷藏备用。 


1. 2. 2 SDG 检测的超声波辅助萃取前处理 


称取 1. 500 g( 精确至 0. 001 g) 脱脂亚麻籽粉, 依次加入一定料液比的溶剂,置于一定温度的恒温 水浴中,在一定超声功率下萃取一定时间,离心并合 并萃取一定次数的上清液,旋蒸后加入 4. 5 mL 0. 3 mol /L 的 NaOH 溶 液,常 温 水 解 6 h,再 加 入 0. 6 mol /L 盐酸溶液调节 pH 至 6. 5 ~ 7. 5,旋蒸去除溶 剂,加入色谱纯甲醇溶解并定容至 10 mL,用 0. 45 μm 醋酸纤维素膜过滤,采用 HPLC 测定 SDG 含量 ( 以每克脱脂亚麻籽粉所含的 SDG 含量计) 。


1. 2. 3 HPLC 测定 


SDG 含量的标准曲线绘制 称取 SDG 标准品 5. 00 mg( 精确到 0. 01 mg) , 色谱纯甲醇溶解定容配制成 0. 5 mg /mL 的标准储 备溶液,定容稀释配制成质量浓度分别为 0. 5、0. 2、 0. 08、0. 032、0. 128、0. 005 12 mg /mL 的标准溶液。 参考 Li 等的方法( 略作改动) ,进行 HPLC 检测 并绘制标准曲线。 色谱条件: 流动相 A 相为超纯水 - 乙酸( 体积比 98∶ 2) ,B 相为甲醇; 柱温 30 ℃; 流速 0. 8 mL/min; 洗 脱梯度为 0 min 时 85% A、15% B,20 min 时 85% A、 15% B,30 min 时 72% A、28% B,40 min 时 72% A、 28% B,60 min 时 45% A、55% B,70 min 时 45% A、 55% B,80 min 时 15% A,85% B,81 min 时 85% A、 15% B,91 min 时 85% A、15% B。 经拟合得到 SDG 标准曲线方程 y = 1 × 107 x - 99 803,其中 x 为峰面积、y 为 SDG 质量浓度,相关 系数 R2 为 0. 999 4。 


1. 2. 4 HPLC 测定亚麻籽样品中 SDG 含量 


取 1. 2. 2 所制取样品按 1. 2. 3 进行 HPLC 测 定,将峰面积代入标准曲线方程中,计算 SDG 含量。 


2 结果与讨论 


2. 1 萃取溶剂的选择 


在料液比 1∶ 20、超声温度 35 ℃、超声功率 800 W 的条件下超声 2 h,萃取次数 1 次,考察萃取溶剂 对 SDG 含量的影响。根据 SDG 的结构性质,选用 极性溶剂进行萃取前处理,所选溶剂为乙醇、甲醇、 乙腈及 90%的甲醇 - 水溶液,结果如图 1 所示。

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由图 1 可以看出,90% 甲醇 - 水溶液作为萃取 溶剂时 SDG 含量很低,这是因为在旋蒸去除溶剂的 过程中,整个溶液体系出现起泡现象,导致样品损 失,从而使得 SDG 含量很低,因此含水有机溶剂不 适合用作萃取剂。而在纯溶剂的对比中,3 种溶剂 萃取所得 SDG 含量由低到高依次为乙醇 < 乙腈 < 甲醇,并且差异较大,甲醇萃取效果最好,因此确定 萃取溶剂为甲醇。


2. 2 料液比的选择 


以甲醇为萃取溶剂,在超声温度 35 ℃、超声功率 800 W 的条件下超声 2 h,萃取次数 1 次,考察料 液比对 SDG 含量的影响,结果如图 2 所示。


3 结 论 


对 HPLC 测定亚麻籽中 SDG 含量的超声 波辅助萃取前处理条件进行了研究,通过单因素试 验确定了超声波辅助萃取前处理的最佳条件: 以甲 醇为萃取溶剂,料液比 1∶ 20,超声时间 2 h,超声温 度 35 ℃,超声功率 800 W,萃取次数 3 次。在最佳 条件下,测得亚麻籽中 SDG 含量为 11. 40 mg /g。




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