达原饮中芍药苷分析（昆山舒美KQ-500DE使用）

1　材料与方法 

1.1　仪器 

美国Finnigan公司TSQ Quantum Discovery MAX 型液质联用系统（LC-MS/MS，美国Finnigan公司）；Eppendorf 5427 R台式高速冷冻离心机（Eppendorf中 国有限公司）；XW-80A 旋涡混合器（上海青浦沪西仪 器厂）；BS110S 型电子天平 [ 赛多利斯科学仪器（北 京）有限公司]；昆山舒美KQ-500DE型数控超声波清洁器（昆山市超声仪器有限公司）。 

1.2　药物与试剂 

芍药苷（纯度：96.4%，批号：110736-201438）购 自中国食品药品检定研究院；黄芩苷（纯度：93.3%， 批号：110715-201318）购自中国食品药品检定研究 院；黄芪甲苷（内标，纯度：93.0%，批号：110781- 201515）购自中国食品药品检定研究院；芍药、黄 芩、槟榔、厚朴、草果、知母、甘草药材购自湖北蕲 州中药材市场；色谱纯甲醇和乙腈购自美国 Fisher Scientific公司；水为娃哈哈饮用纯净水（杭州娃哈哈 集团有限公司）。 

1.3　动物 

6 只雄性 SD 大鼠，体质量（220±20）g，购自 北京维通利华动物实验中心，实验动物合格证号： SCXK（京）2014 – 0016。动物饲养于温度控制在 （25±2）℃、湿度控制在40% – 60%的环境中，每天 交替进行12 h光照，12 h黑暗处理。

2　结果

采用大鼠空白血浆样品、大鼠空白血 浆加入被测物标准液和内标的样品、大鼠给药1 h后 血浆样品进行处理进样，得到大鼠血浆中被测物和内 标的典型色谱图。显示血浆中内源性物质不 干扰被测物和内标的测定，且被测物和内标之间的分 离度良好。芍药苷、黄芩苷和内标的出峰时间分别为 1.91 min、3.08 min、3.69 min，出峰位置无干扰，方法 的专属性良好。采用加权最小二乘法计 算标准曲线方程，以被测物与内标黄芪甲苷的峰面积 比值为Y，以被测物的质量浓度为X，得到芍药苷的回 归方程为Y = 5.148×10-4 X – 2.6148×10-3，权重因子 W = 1/X2 ，相关系数r 2 = 0.995 1；黄芩苷的回归方程为 Y = 6.613×10-4 X + 1.863 2×10-3，权重因子W = 1/X2 ， 相关系数r 2 = 0.996 5。芍药苷和黄芩苷的定量下限均为5 ng·mL-1，连续进样6次，被测物准确度在80% – 120%范围内，精密度（RSD）小于20%，参照《药物非 临床药代动力学研究技术指导原则》，该结果符合生 物样品测试要求。

3　讨论

采用高效液相色谱法探讨达原饮中芍药苷、黄芩苷等有效成分含量的研究已有报道，考虑到高 效液相色谱法的灵敏度较低，且达原饮中各有效成分 的含量较低，故本研究采用LC-MS/MS技术研究达原 饮中两种成分在大鼠体内的药代动力学特征，建立 了大鼠血浆中芍药苷和黄芩苷浓度同时测定的方法， 并进行了方法学验证。兼顾本实验室液质联用系统 的仪器性能、达原饮中芍药苷和黄芩苷的含量及给 药剂量，本研究将两种化合物的线性范围设定为5 ~ 2000 ng·mL-1可以满足本药代动力学研究的需要。

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