油橄榄叶抑菌分析（昆山舒美KQ-500DB使用）

1 材料与方法 

1． 1 实验材料

油橄榄叶提取物( OLE) : 由陇南田园油橄榄科 技开发有限公司提供，主要活性成分及含量为橄榄 苦苷 34． 62% 、总多酚 0． 15% 、总黄酮 10． 23% 。 大肠杆菌( Escherichia coli ) CVCC1570、抗四环 素大 肠 杆 菌、金黄色葡萄球菌 ( S． aureus) CVCC 1882、金黄色葡萄球菌( SH7) ，购自中国兽医药品监 察 所; 表 皮 葡 萄 球 菌 ( Staphylococcus epidermidis) CMCC26069、铜绿假单胞菌( Pseudomonas aeruginosa) ATCC27853、蜡 状 芽 孢 杆 菌 ( Bacillus cereus) CMCC( B) 63302，购自北京北纳创联生物技术研究 院; 枯草芽孢杆菌( B． subtilis) ，保藏于西北师范大 学生命科学学院微生物实验室。牛肉膏、蛋白胨、琼脂粉、BR 生化试剂，购自海 博生物技术有限公司。氯化钠、盐酸小檗碱、氯化三 苯四氮唑( TTC) 、二甲基亚砜( DMSO) ，分析纯。

LDZX － 30KBS 型立式压力蒸汽灭菌器，上海申 安医疗器械厂; BT － 25S 型电子天平，德国赛多利 斯; IS － RDV1 型恒温振荡器，美国 Crystal; HFsafe 1500 型生物安全柜，上海力申科学仪器有限公司; WP － RO － 10B 型实验室专用超纯水机，四川沃特 尔科技发展有限公司; TU － 1810DPC 型紫外可见分 光光度计，北京普析通用仪器有限责任公司; DNP －9052 － 1A 型电热恒温培养箱，上海鸿都电子科技有 限公司; 不锈钢数显卡尺，天 津 市 量 具 厂; KQ － 500DB 型数控超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司。

1． 2 实验方法

10 倍稀释法制备菌悬液: 分别吸取稀释至 10 － 5 、 10 － 6 、10 － 7 、10 － 8 、10 － 9 倍的菌悬液 100 μL 于牛肉膏蛋 白胨琼脂培养基中涂布，37 ℃恒温培养 18 h，对菌落 数在 30 ～300 之间的培养皿进行计数，求平均值。最 终挑选菌液浓度为 106 ～107 CFU/mL 菌悬液备用。采用 96 孔板肉汤稀释法测定 OLE 对 8 种供 试菌的 MIC 和 MBC。盐酸小檗碱作为对照，每孔中 加入牛肉膏蛋白胨液体培养基 100 μL，96 孔板的 A ～ D 行第 1 孔中加入 100 μL 64 mg /mL 的 OLE 样 品，E ～ H 行第 1 孔中加入 100 μL 64 mg /mL 的盐酸 小檗碱样品，二倍稀释法使药液浓度呈梯度递减，第 10 孔中取出的药液与培养基混合液弃去，第 11 孔 为加药不加菌液的阴性对照，第 12 孔为加菌液不加 药的空白对照。除第 11 列和第 12 列，每孔中加入 5 μL 菌悬液，置于微型振荡器上振荡 1 min，使各孔 内溶液混匀，37 ℃ 孵育 18 h，以肉眼观察无浑浊的 药液质量浓度即为受试菌的 MIC。

2 结果与分析

8 种细菌对空白对照均表现出不 敏感或敏感度不明显，实验质量浓度范围内铜绿假 单胞菌对 OLE 表现不敏感或低度敏感，OLE 对其他 7 种细菌都有抑菌作用。OLE 质量浓度为 1 mg /mL 时，蜡状芽孢杆菌和铜绿假单胞菌表现为不敏感，其 他细菌均表现为低度敏感。OLE 质量浓度为 5 mg /mL 时，枯草芽孢杆菌和蜡状芽孢杆菌分别表现为低度萄球菌、金黄色葡萄球菌( SH7) 及大肠杆菌的抑制 作用较强，对蜡状芽孢杆菌、抗四环素大肠杆菌的抑 制作用较弱。

与对照盐酸小檗碱相比，OLE 对 枯草 芽 孢 杆 菌、表 皮 葡 萄 球 菌、金黄色葡萄球菌 ( SH7) 的抑菌效果低于盐酸小檗碱，而对蜡状芽孢 杆菌、金黄色葡萄球菌、抗四环素大肠杆菌的抑菌效 果优于盐酸小檗碱，对大肠杆菌的抑菌效果与盐酸 小檗碱的相当。有研究报道橄榄苦苷对金黄色 葡萄球菌的 MIC 为 0. 031 2 ～ 0． 125 mg /mL; 橄榄总 黄酮对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草杆菌均有抑 制作用，对大肠杆菌、枯草杆菌、金黄色葡萄球菌的 MIC 分别为 0． 25、0． 125、0． 062 5 mg /mL。以上研 究与本实验结果存在差异，这可能主要与供试样品 的来源及纯度有关系。

3 结 论

采用稀释法分析了 OLE 对 8 种致病菌的 MIC 和 MBC。结果显示，OLE 与盐酸小檗碱在测试 质量浓度范围内对铜绿假单胞菌无抑制作用，对表 皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌及大肠杆菌的抑制作 用较强，对蜡状芽孢杆菌、抗四环素大肠杆菌的抑制 作用较弱。

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