昆山超声对龙利叶指纹图谱分析

龙利叶来源于大戟科守宫木属植物龙 利 叶 ，收录于《中国药典》２０１５版一部，其性平、味甘、归肺、胃经，具有清热润肺、化痰止咳、定 喘、通便之功效，主治肺热咳嗽、痰火咳嗽、肺结核咳嗽、肺痨咯血、支气管炎、支气管哮喘、大便秘结等。亦 有文献记载：以龙利叶猪肉汤食之，可治疗痰火咳嗽。现代药理研究表明龙利叶的水提液具有抗炎、 镇痛及止咳祛痰作用，其根和茎的水提取液具有抗炎和镇痛作用。

目前对龙利叶质量评价方面，主要是对其显微鉴别、紫外光谱鉴别和化学成分方面，本课题组前期也 对龙利叶茎的指纹图谱进行了研究。为了科学评价龙利叶质量，为龙利叶质量控制方法提供科学的 依据，本文对不同产地的龙利叶叶的指纹图谱进行研究。

ＫＱ５００ＤＥ超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；ＳＨＢ－ＩＩＩ循环水式多样真空泵（郑州长城科工 贸有限公司）；ＵＰＣ－１１－１０Ｔ实验室超纯水器（四川优谱超纯有限公司）；Ａｌｌｉａｎｃｅｅ２６９５高效液相色谱 仪，Ｗ２９９８ＰＤＡ 检测器（美国 ＷＡＲＴＥＲＳ公司）；ＡＪ１５０电子分析天平（瑞士梅特勒公司）；Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ色 谱柱 （４．６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ，美国菲罗门）；ＷｏｎｄａＳｉｌＣ１８－ＷＲ 色谱柱 （４．６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ，日 本岛津）；ＨｙｐｅｒｓｉｌＣ１８色谱柱（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ，大连依利特）。

１０批不同产地的龙利叶（见表１）经广西一心药业副主任药师马利飞鉴定为大戟科守宫木属龙利叶 Ｓａｕｒｏｐｕｓｒｏｓｔｒａｔｕｓ Ｍｉｑ．（ＳａｕｒｏｐｕｓｓｐａｔｕｌｉｕｓＢｅｉｌｌｅ）的干燥叶。 山奈酚（对照品，中国食品药品检定研究院，纯度９９％，批号：１１０８６１－２０１３１０）；冰醋酸（天津市光复 精细化工 研 究 所，色 谱 纯，批 号：２０１４０６０５０１）；乙 腈（美 国 Ｆｉｓｈｅｒ公 司，色 谱 纯，批 号：１２２６９７）；水（超 纯 水）；其他试剂均为分析纯。

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２ 实验方法

２．１ 对照品溶液的制备

称取山奈酚对照品适量，精密称定１２．０ｍｇ，置于２０ｍＬ 容量瓶中，以甲醇溶解并定容至刻度，即得 ０．６ｇ／Ｌ的山奈酚对照品溶液。

取龙利叶样品适量，精密称定２．０００ｇ，加入乙酸乙酯３０ｍＬ，超声提取６０ｍｉｎ，滤过，水浴蒸干溶剂， 加入适量山奈酚，加入甲醇溶解，转移至５ｍＬ容量瓶，甲醇定容至刻度，过０．２２μｍ 微孔滤膜，即得供试 品溶液。

色谱柱：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ色谱柱（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ）；流动相：乙腈－０．１％冰醋酸（梯度洗脱，洗脱 程序见表２），流速１ｍＬ／ｍｉｎ；柱温３０ ℃；测定波长３０５ｎｍ；进样量２０μＬ。

３ 实验结果

３．１ 精密度实验

取供试品溶液，按２．３节的色谱条件连续进样６次，考察仪器精密度。结果表明，各共有峰相对保留 时间 ＲＳＤ为０．０２％～０．０３％，相对峰面积 ＲＳＤ 为０．２４％～０．８８％，均小于３％，表明仪器精密度良好，符 合指纹图谱的检测要求。

取供试品溶液，按２．３节的色谱条件，分别在０、２、４、６、８、１０、１２ｈ进样、检测，结果表明各共有峰相对 保留时间 ＲＳＤ为０．０２％～０．０３％，相对峰面积 ＲＳＤ为０．２８％～０．７８％，均小于３％，表明供试液在１２ｈ内 稳定。

取同一批次龙利叶，按照２．２节供试品溶液的制备方法制备供试品溶液６份，按２．３节下色谱条件测 定，结果表明各共有峰的相对保留时间 ＲＳＤ为０．０２％～０．０３％，相对峰面积 ＲＳＤ为０．８８％～１．８１％，ＲＳＤ 均小于３％，表明重复性良好。

按照２．２节方法制备１０批广西不同产地龙利叶的供试品溶液，按照《中药注射剂指纹图谱研究的技 术要求（暂行）》建立广西不同产地龙利叶 ＨＰＬＣ指纹图谱。通过记录１２０ｍｉｎ图谱，８０ｍｉｎ后无色谱峰 出现，从而确定指纹图谱的采集时间为８０ｍｉｎ。取供试品溶液依次进样，记录１０批广西不同产地龙利叶 的 ＨＰＬＣ色谱图。

《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求（暂行）》中规定，制定指纹图谱必须设立参照物，应根据供试品 中所含化学成分的性质，选择适宜的对照品作为参照物。由于在龙利叶的指纹图谱中，共有峰均为未明确 的化学成分，山奈酚化学性质稳定，且在广西龙利叶的 ＨＰＬＣ指纹图谱中稳定，故选山奈酚作为内标物和 指纹图谱的参照峰，标记为Ｓ，按照２．３节下确定的色谱条件，测定山奈酚对照品溶液和不同产地龙利叶供 试液的 ＨＰＬＣ图谱。

结果表明：不同产地龙利叶的指纹图谱共标定８个共有峰，８个共有 峰的相对保留时间的 ＲＳＤ均小于３％；１０个不同产地龙利叶指纹图谱与对照指纹图谱的相似度值均大于 ０．９，与对照指纹图谱有良好的相似性，说明不同产地龙利叶的成分差异不大，各共有峰的峰面积相差较大 （ＲＳＤ大于３％），说明不同产地龙利叶的成分含量有较大差异，不同产地的龙利叶在质量上有一定的差 异。由于地理环境、采收时间、气候等因素对药材的质量都会产生影响，今后可采集更多产地的龙利叶进 行实验研究，积累数据，为龙利叶的质量评价提供科学依据。 由于中药成分较为复杂，本研究通过梯度洗脱程序建立龙利叶的 ＨＰＬＣ指纹图谱，从整体上表征了 龙利叶的化学成分特征，今后可进一步结合药效进行谱效分析，建立龙利叶的质量评价模式。