昆山超声仪器在HPLC法同时测定麒麟丸中的3种成分

麒麟丸由制何首乌、墨旱莲、淫羊藿、菟丝子、锁阳、 党参、郁金、枸杞子、覆盆子、山药、丹参、黄芪、白 芍、青皮、桑椹等 15 味中药组成，能够补肾填精，益气 养血。适用于肾虚精亏，血气不足，腰膝酸软，倦怠乏 力，面色不华，男子精液清稀，阳痿早泄，女子月经不 调，或男子不育症，女子不孕症见有上述证候者。目前， 该质量标准设立了制何首乌中大黄素含量的薄层色谱扫 描法作为含量测定项，文献中也仅有报道制何首乌中二 苯乙烯苷的含量测定方法 ，对该组方中其它成分的含 量测定方法未见报道。该方中青皮具有疏肝理气、消积化滞的功效，其主要活性成分为黄酮类成分，现代药理 学研究表明橙皮苷具有抗氧化和延缓衰老的作用；丹 参具有活血化瘀，通经止痛的功效，用于胸痹心痛，症 瘕积聚，月经不调等。其主要活性成分为丹参酮和丹酚 酸类组分。其中丹酚酸 B 具有抗氧化、防治动脉粥样硬 化等作用；淫羊藿具有补肾阳，强筋骨的功效，用于 肾阳虚衰，阳痿遗精，筋骨痿软 ；淫羊藿总黄酮为其主 要活性成分，其中淫羊藿苷具有增强免疫力，抗氧化和 抗衰老的药理作用。因此，本实验选择橙皮苷、丹 酚酸 B 和淫羊藿苷为指标成分，建立 HPLC 方法同时测 定上述 3 种成分的含量，为其质量控制提供依据。

Agilent 1260高效液相色谱仪（美国 Agilent 公司）；HZQ-50H 加热回旋振荡器（上海一恒科学仪器有限公 司）；KQ-500DE 超声波清洗器（昆山超声仪器有限公 司）；5810R 离心机（德国 Eppendorf 公司）。

橙皮苷购自百灵威科技（ 批号L190Q57，纯度 98.1%）；丹酚酸B购自成都普瑞法科技开发有限公司（批号 PRF7060803，纯度 98.3%）；淫羊藿苷购自南京景竹生物科技有限公司（批号 JZ16121109，纯度 98.7%）；麒麟丸来自广东太安堂药业股份有限公司（批 号 A20161101、B20180807 和 B20180809，60 g/ 瓶）；乙腈、三氟乙酸为色谱纯 ；其他试剂均为分析纯 ；水为纯净水。

取麒麟丸适量研细，精密称取 2 g，至 100 ml 具塞 锥形瓶中，加入 50% 乙醇溶液 50 ml，称定重量，37 ℃ 振摇 30 min，再超声 30 min，用 50% 乙醇补足减失的重 量，摇匀，过 0.45 mm 聚四氟乙烯滤膜，取续滤液，即得。

取橙皮苷对照品 30 mg，精密称定，置 100 ml 量瓶 中，精密加入 1 ml 二甲基亚砜使溶解，然后加入 50% 乙醇溶液稀释并定容至刻度，摇匀，作为橙皮苷的对照 品溶液 ；称取 16 mg 丹酚酸 B，置于 100 ml 量瓶中，加 入 50% 乙醇稀释并定容至刻度，摇匀，作为丹酚酸 B 的 对照品溶液 ；精密称取 10 mg 淫羊藿苷，置于 100 ml 量 瓶中，加入 50% 乙醇稀释并定容至刻度，作为淫羊藿苷 的对照品溶液 ；精密吸取上述各对照品溶液各 5 ml 置于 100 ml 量瓶中，加 50% 乙醇定容至刻度，摇匀，制成每 1 ml 含橙皮苷 15 mg、丹酚酸 B 8 mg、淫羊藿苷 5 mg 的 混合对照品溶液 ；精密吸取 2、3、4、5 和 6 ml 至 10 ml 量瓶中，加 50% 乙醇定容至刻度，即得系列浓度的混合 对照品溶液。

色谱柱为 Vensuil XBP C18（4.6 mm×250 mm，5 mm）；流动相 A 为含 0.05% 三氟乙酸的水溶液、B 为 含 0.05% 三氟乙酸的乙腈溶液，梯度洗脱（0 ～ 48 min， 90%A→70%A ；48 ～ 55 min，70%A→5%A）；体积流量 1.2 ml/min ；柱温 30 ℃ ；检测波长 220 nm ；进样量 10 ml。

将对照品和供试品溶液分别进样测试，理论塔板数 均 >5 000，各峰与相邻峰的分离度 >1.5（图 1）。

2.2 线性关系考察

以峰面积为纵坐标（Y）、质量浓度（mg/ml）为横 坐标（X），绘制标准曲线，各成分在各自浓度范围内线 性关系良好（表 1）。

2.3 精密度试验

同一供试品溶液连续进样 6 次进行测定，计算橙皮 苷、丹酚酸 B 和淫羊藿苷色谱峰的峰面积，RSD 分别为 0.8%、1.5% 和 1.1%，表明仪器的精密度良好。 2.4 重复性试验 精密称取同一供试品（批号 A20161101）粉末 2.0 g， 共 6 份，按“1.3.1”项下方法制备供试品溶液，HPLC测定并计算得橙皮苷、丹酚酸 B、淫羊藿苷的 RSD 分别 为 0.8%、1.5%、1.1%，表明该方法重复性良好。 2.5 稳定性试验 取供试品溶液于 0、20、50、90 h 进样测定，测得 橙皮苷、丹酚酸 B、淫羊藿苷峰面积 RSD 分别为 0.6%、 1.2%、0.7%，说明供试品溶液在 90 h 内稳定性良好。

流动相曾选择考察了乙腈 - 磷酸、乙腈 - 醋酸 - 醋 酸铵、乙腈 - 三氟乙酸和不同梯度下的洗脱情况，发现 在乙腈 -0.05% 三氟乙酸条件下洗脱色谱峰峰型和分离效 果均比较好，因此选择乙腈 -0.05% 三氟乙酸作为流动相。 采用二极管阵列检测器，在 200 ～ 400 nm 范围内 进行光谱扫描，发现橙皮苷、丹酚酸 B 和淫羊藿苷的最 大波长分别为 282 nm、286 nm、270 nm，此外，3 种成 分在波长 220 nm 和 230 nm 均有明显的吸收，因此，分 别对220 nm、230 nm和270 nm波长下的色谱峰进行分析， 发现 220 nm 波长下各成分的响应值最大，且分离度良好，因此，选择 220 nm 作为检测波长。