多评法测定异毛蕊花糖苷和异泽兰黄素的含量

鼠曲草为菊科植物鼠曲草 Gnaphlium affine D. Don 的全草，具有祛痰、止咳、平喘、祛风湿等功 效，主要活性成分有黄酮类、二萜类、有机酸类 等，鼠曲草有降血压、降尿酸等药理作用，且药食 两用，具有较大的研究价值和开发潜力。鼠曲草的 多成分、多功效的作用特点，单一成分难以反应其 内在质量。因此，应选择多成分、多指标的测定方 法，对与其功效相关的化学成分进行全面综合的评 价。2006 年，王智民提出了一种新的评价中药内在 质 量 模 式 ， 即 一 测 多 评 法（quantitative analysis of multi-components by single marker，QAMS）。QAMS 以样品中某一成分为内参物，建立该成分与其他成 分间的相对校正因子，通过相对校正因子计算其他 成分的含量。该方法具有快速、简便并能同时实现 多成分同步测定等优点。本实验采用 QAMS 技 术，以绿原酸为内参物，测定鼠曲草中的咖啡酸、 异毛蕊花糖苷和异泽兰黄素的相对校正因子，建立 鼠曲草药材的 QAMS 方法，以期为鼠曲草质量控制 提供新的评价模式。

Shimadzu LC-2010AHT 高效液相色谱系统 （日本岛津公司）；Agilent 1220 液相色谱仪系统（美 国安捷伦公司）；色谱柱：Agilent HC-C18（4.6 mm × 250 mm，5 μm），UItisiITMAQ-C18（4.6 mm×250 mm， 5 μm），Inertsil ODS-3（4.6 mm× 250 mm，5 μm）； BS210S 万分之一分析天平（德国 Sartorious 公司）； KQ-250D 型数控超声仪（昆山市超声仪器有限公司）。

鼠曲草采集于汉中连城山及购买于江西、福建、云南，经西安医学院张寒副教授鉴定 为菊科鼠曲草属鼠曲草 Gnaphlium affine D. Don 的全 草；绿原酸（成都艾科达化学试剂有限公司，批号： MUST-12031401，纯度≥98%）；咖啡酸（西安开来生 物工程有限公司；批号：K120711，纯度≥98%）；异 毛蕊花糖苷和异泽兰黄素（成都埃法生物科技有限公 司，批号：AF8032807，AF7112223，纯度≥98%）。 乙腈、甲醇均为色谱纯；其余试剂均为分析纯。水 为娃哈哈饮用纯净水。

色谱柱：Agilent HC -C18（4.6 mm × 250 mm，5 μm）；检测波长 360 nm；柱温 27 ℃；体 积流量 1 mL·min- 1 ，进样量 10 μL；流动相为乙腈 （A）-0.2%磷酸水（B），梯度洗脱（0～8 min，6%～ 15% A； 8～30 min， 15% ～20% A； 30～33 min， 20%～30% A；33～60 min，30%～40% A）。在上述 色谱条件下，各组分分离度良好，样品和标准品色 。

分别取绿原酸、异毛 蕊花糖苷和异泽兰黄素对照品 5 mg，咖啡酸对照品 10 mg，精密称定，分别置于 10 mL 容量瓶中，加甲 醇溶解，定容至刻度，配制成质量浓度为绿原酸 0.52 mg·L- 1 、咖啡酸 1.06 mg·L- 1 、异毛蕊花糖苷 0.53 mg·L-1 和异泽兰黄素 0.50 mg·L-1 。分别精密量 取 1 mL 上述各对照品溶液置于 10 mL 容量瓶，加甲醇 定容至刻度，配制成质量浓度为绿原酸 0.052 mg·L-1 、 咖啡酸 0.106 mg·L-1 、异毛蕊花糖苷 0.053 mg·L-1 和异泽兰黄素 0.050 mg·L-1 的混合对照品溶液。

鼠曲草药材干燥粉碎后取 粉末 0.1 g，精密称定，置 25 mL 容量瓶中，加入 20 mL 的甲醇超声处理 15 min 后，取出放凉后定容 至刻度，取上清液过 0.45 μm 滤膜，即得。 2.2.3 线性关系考察 精密吸取上述混合对照品溶液 0.4、1、2、3、4 mL 分别放置在 10 mL 的容量瓶 中，用甲醇定容后分别进样，以进样量对峰面积积 分值进行回归处理，得到绿原酸、咖啡酸、异毛蕊 花糖苷和异泽兰黄素的标准曲线。

3 讨论

鼠曲草含黄酮类、二萜类、有机酸类等活性成 分，其中绿原酸具有抗氧化、抗菌、抗癌、降血 脂、降血糖等药理作用；咖啡酸具有抗氧化、升血 小板、抗血小板凝集、抗氧化、抗肿瘤和脑保护作 用[6] ；异毛蕊花糖苷有抗氧化、抗溶血、抑制血管紧 张素转化酶及抗高血压的活性 ；异泽兰黄素有抗胃 肿瘤、抗氧化的作用。因此本研究选择这 4 种化合 物作为鼠曲草质量评价的指标。绿原酸在鼠曲草中 化学性质相对稳定且含量相对较高，对照品价廉易 得，其提取分离纯化工艺相对成熟，故选用其做为 内参物。本研究分别考察了不同的色谱柱及色谱仪 对相对校正因子、相对保留时间的影响，实验结果 表明，咖啡酸、异毛蕊花糖苷、异泽兰黄素的相对 校正因子的重现性较好。同时采用外标法测定了鼠 曲草中咖啡酸、异毛蕊花糖苷、异泽兰黄素的含 量，比较外标法和一测多评法所得含量的结果，发 现两种方法得出的结果无显著性差异。说明本实验 计算得到的相对校正因子可以作为一个稳定的参数 运用于鼠曲草各成分的含量计算。