化学成分含量的相关性研讨

附子为毛茛科植物乌头 Aconitum carmichaelii Debx. 的子根的加工品 。在我国传统医学中应用历 史悠久，被称为“回阳救逆第一品”。《中华人民共和 国药典》2015 年版一部中附子以苯甲酰新乌头原碱 （C31H43NO10）、苯甲酰乌头原碱（C32H45NO10）和苯甲酰 次乌头原碱（C31H43NO9）这 3 个单酯型生物碱的总量 作为质量控制指标，含量的高低可以反映附子的内在质 量。附子不同的性状中，黑顺片为外皮黑褐色、切面暗 黄色，白附片为黄白色。那么，这种基于有效成分含量 的质量评价与传统的外观色泽之间是否具有相关性，或 者说，能否采用色泽的测定进行附子质量的评价，起到 更加便捷、快速、经济的效果，是人们关心的问题。

NH310 型 高 品 质 便 携 式 电 脑 色 差 仪［光 源： D65（代表自然日光，6504 K），CIE（国际照明委员 会）认可，深圳市三恩驰科技有限公司］；DFT-50A 型手提式高速粉碎机（温岭市林大机械有限公司）； LC-20AT 型 高 效 液 相 色 谱 仪，SPD-M20A 型二极 管阵列检测器（岛津公司）；电子分析天平（XS105 DualRange-0.000 01 g，Ohaus CP224C-0.000 1 g）； KQ-100E 型超声波清洗器（100 W，昆山市超声仪器有限公司）；DHG-9063A 型电热鼓风干燥箱（上海一恒科学仪器有限公司）；RV10DS77 型旋转蒸发仪 （Ika 仪器设备有限公司）。

色差仪利用的 CIE LAB 色度空间为 1976 年 CIE 推荐的均匀颜色空间，1987 年我国发布 GB7921-87， 将 LAB 空间作为国家标准。CIE LAB 是利用△L、 △a、△b 3 个坐标轴，指示颜色在几何空间中的位 置 。△L 表示明度，数值越大越感觉白，越小越 感觉黑；△a 表示红色到绿色，数值越大越感觉红，越 小越感觉绿；△b 表示从黄色到蓝色，数值越大越感 觉黄，越小越感觉蓝。 首先进行黑白校正，然后以白色 A 4 打印纸作 为标准测定 L* 标、a* 标、b* 标，再取附子样品粉末（过 3 号筛）约 3 g 置于样品皿中，测定 L* 样、a* 样、b* 样， 计算△L=L* 样 -L* 标，△a=a* 样 -a* 标，△b=b* 样 -b* 标， △E=（△L2 + △a2 + △b 2 ）1/2，结果见表 2。 2.2 3 种单酯型生物碱的含量测定 2.2.1　 色 谱 条 件　 采 用 Diamonsil Plus C18 色谱柱 （150 mm×4.6 mm，5 μm），流动相 A 为乙腈 - 四氢呋 喃（25 ∶ 15），流动相 B 为每 1 000 mL 加冰醋酸 0.5 mL 的 0.1 mol·L-1 醋酸铵溶液，梯度洗脱（0~48 min， 12%A → 22%A；48~50 min，22%A → 35%A），流 速 1.0 mL·min-1，检测波长 235 nm，柱温 30 ℃，进样量 10 μL。

在 D65 光源下色度值△L 介 于 -34.38~-14.76，平 均 值 为 -23.06；△a 介 于 2.54~5.22，平 均 值 为 3.43；△b 介 于 10.94~16.34， 平均值为 12.81；△E 介 于 20.13~37.05，平 均 值 为 26.80。应用 SPSS 分析软件。L 与苯甲酰新乌头 原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱的含量及 3 个单酯型生物碱的总含量呈负相关，与 5-HMF 的 含量呈正相关；△a 与苯甲酰新乌头原碱及 5-HMF 的含量呈负相关，与苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头 原碱及 3 个单酯型生物碱的总含量呈正相关；△b 与 苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱和 5-HMF 的 含量、3 个单酯型生物碱的总含量均呈负相关，与 苯甲酰次乌头原碱的含量呈正相关；△E 与苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱的含量呈显著正相关 （P<0.05），与苯甲酰次乌头原碱及 3 个单酯型生物碱 的总含量呈极显著正相关（P<0.01），与 5-HMF 的含 量呈负相关。

5-HMF 是麦拉德（Maillard）反应的产物之一， 目前，包括 5-HMF 在内的 Maillard 反应产物的药理 和毒理作用存在较多争议，加之附子本身为毒性中 药，因此控制其 5-HMF 的含量有重要意义。 本研究采用色差仪对附子进行色泽的客观量化， 实现了附子的传统性状描写从主观经验向客观量化 的转变；在现有研究基础上优化了 5-HMF 的 HPLC 含量测定方法 ，进行了方法学的验证，并进行了 附子中 5-HMF 的 HPLC 含量测定；进行色泽量化指 标与 3 个单酯型生物碱含量及其总含量、5-HMF 含 量的相关性分析，发现了它们之间的对应关系，对于 全面评价附子的质量提供了科学的依据。