不同方法测定舒脑欣滴丸中藁本内酯含量的比较

舒脑欣滴丸由川芎和当归两味药材提取加工制 成，具有理气活血、化瘀止痛的功效。临床上常 用于治疗血虚血淤引起的头痛、头晕、偏头痛、视物 昏花、健忘及失眠等症状，疗效较为显著。而藁 本内酯是其主要活性成分之一，药理研究表明，藁本 内酯具有保护脑神经、改善微循环、舒张血管、抑制 血管平滑肌细胞增殖、抗癌、抗微生物、解热、镇痛消 炎等药理作用。目前，藁本内酯的含量测定方法 多采用高效液相色谱法，因藁本内酯为挥发油成 分，也有气相色谱法测定。本次实验建立了舒脑欣 滴丸藁本内酯的液相测定方法和气相测定方法，比 较不同测定方法对舒脑欣滴丸中藁本内酯含量测定 结果的影响。

GC-2014C 气相色谱仪( 日本岛津仪器有限公 司) ; HV-3 静音无油空压机( 济南浩伟实验仪器有 限公司) ; 纯水氢气发生器( 济南浩伟实验仪器有限 公司) ; Waters e2695 型高效液相色谱仪( 美国 Waters 公 司) ; 2998 PDA Detector 紫 外 检 测 器; KQ250DB 型数控超声波清洗器( 昆山市超声仪器有限 公司) ; 电子天平( 德国赛多利斯) 。

舒脑欣滴丸( 天津中新药业集团股份有限公 司，批号: 676018) ; 藁本内酯标准品( 实验室自制) ; 微孔滤膜( 孔径 0. 45 μm) ; 甲醇( 色谱纯，天津市凯 通化学试剂有限公司) ; 乙酸( 分析纯，天津市凯通 化学试剂有限公司) ; 纯净水。

GC-2014C 气相色谱仪，色谱柱: KB-624 毛细管柱( 30 m × 0. 32 mm × 1. 80 mm) ，检 测器: 氢焰离子化检测器( FID) ，进样口温度 220℃， 检测器温度 320℃，色谱柱温度 220℃，载气为氮气， 进样量为 1 μL。

精密称量藁本内酯对 照品 5. 6 mg 于 25 mL 容量瓶中，加入甲醇定容至刻度，摇匀，制成浓度为 200 μg·mL － 1 的藁本内酯溶 液，避光冷保存。

取舒脑欣滴丸 5 粒，粉 碎，精密称重，置具塞锥形瓶中，精密加入 70% 的甲 醇 10 mL，称量，超声处理 30 min，冷却，再次称定其 重量，用甲醇补足失重，0. 45 μm 微膜滤过，精密量 取其续滤液 1 mL 置于 10 mL 容量瓶中，加入 70% 甲醇稀释至刻度，晃匀，即得。

分别取空白溶液、对照品 溶液、供试品溶液，按上述色谱条件进样分析，记录 色谱图，见图 1。从色谱图中可以看出，对照品溶液 中藁本内酯的保留时间为 8. 6 min。供试品溶液主 峰的保留时间与对照品溶液的主峰保留时间一致， 与相邻组分分离较好，无相互干扰。

2. 1. 5 线性关系考察

精密量取藁本内酯对照品 母液 0. 5、1. 0、1. 5、2. 0、2. 5 mL 置 10 ml 棕色容量 瓶中，用甲醇稀释至刻度，晃匀，得一系列不同浓度 的藁本内酯对照品溶液，按“2. 1. 1”项下色谱条件 进样 3 次，取平均值，以峰面积对浓度作线性回归， 得回归方程为: Y = 302. 7X + 392. 4，r = 0. 9993，结 果表明，藁本内酯在 10 ～ 50 μg·mL － 1 范围内线性 关系良好。

取对照品溶液按 “2. 1. 1”项下色谱条件，进样量为 1 μL，重复进样 5 次，记录色谱图，以藁本内酯的峰面积计算藁本内酯 的 ＲSD 为 1. 74% ，表明该方法的精密度良好。 取供试品溶液分别于 0，2，4，6，8，10 h 按 “2. 1. 1”项下色谱条件进样分析，以藁本内酯的峰 面积计算 ＲSD 为 0. 50% ，表明供试品溶液在 10 h 内稳定性良好。

取同一批号舒脑欣滴丸 5 份， 按照“2. 1. 3”项下方法制备供试品溶 液 5 份，按 “2. 1. 1”项下色谱条件进样分析，计算藁本内酯的 峰面积 ＲSD 为 1. 86% ，表明重复性良好。

精密量取“2. 1. 3”项下 已知浓度的供试品溶液 6 份，各加入对照品适量，用 甲醇溶液稀释至刻度，晃匀，按上述色谱条件进样 1μL，每份进样 3 次，以藁本内酯峰面积计算藁本内 酯的平均回收率为 101. 32% ，ＲSD 为 1. 29% 。

取 3 个不同批次的舒脑欣 滴丸样品，按“2. 1. 3”项下方法制备供试品溶液，并 按照“2. 1. 1”项下色谱条件进行测定，计算舒脑欣 滴丸中藁本内酯平均含量为 876. 70 μg /丸。

Waters e2695 高效液相色谱仪， 2998 PDA Detector 紫外检测器，Venusil MP C18 色 谱柱( 4. 6 mm × 250 mm，5 μm) ，流动相为甲醇0. 2% 冰醋酸水溶液( 75∶ 25) ，检测波长为 325 nm 流速为 1. 0 mL /min，进样量 10 μL，柱温 30℃。

取制备的藁本内酯标准 品 2. 5 mg，置于 25 mL 容量瓶中，加甲醇溶解并定 容至刻度，摇匀后即制成浓度为 100 μg /mL 的标准 品贮备溶液，避光冷藏保存。

取“2. 1. 3”项下供试品 溶液即得。

分别取空白溶液、对照品 溶液、供试品溶液，按“2. 2. 1”项下色谱条件进样 10 μL 测定。色谱图如图 2 所示，从图中可以看出藁本 内酯在 9. 9 min 出峰，色谱峰峰型良好，且各组分之 间互不干扰测定。

2. 2. 5 线性关系考察

精密量取对照品溶液适量， 置 10 mL 棕色容量瓶中，用甲醇溶液稀释至刻度，制 成 5、10、20、40、50 μg·mL － 1 的 5 个不同浓度，取系 列不同对照品溶液 10 μL 按“2. 2. 1”项下色谱条件 分别进样，记录色谱图，以藁本内酯的峰面积对其浓 度进行 线 性 回 归，得 回 归 方 程 为: Y = 19525X + 55814( r = 0. 9997) ，表明藁本内酯标准品浓度在 5 ～ 50 μg·mL － 1 范围内与峰面积线性关系良好。

取制备好的供试品 溶液 5 份，按“2. 2. 1”项下色谱条件进样分析，记录 峰面 积，并 计 算 ＲSD 值，结 果 藁 本 内 酯 ＲSD 为 1. 04% ，表明该方法精密度良好。 取“2. 2. 3”项下供试品溶液，分别于 0、2、4、8、 10 h 进样测定，按上述色谱条件进样 10 μL 测定，并 计算藁本内酯的 ＲSD 为 1. 25% ，表明样品溶液在 10 h 内稳定。

取同一批次的舒脑欣滴丸药 品 5 份，按“2． 2． 3”项下方法制备供试品溶液 5 份， 在“2. 2. 1”项下色谱条件下进样 10 μL，记录下峰面 积，并计算 ＲSD 值为 1. 53% ，表明该法重复性良好。

取已知含量的供试品溶 液 3 mL，6 份，置 10 mL 容量瓶中，分别加入对照品 50 μg，用甲醇稀释至刻度，晃匀，按“2. 2. 1”项下色 谱条件进行测定，代入标准曲线计算藁本内酯含量， 算出平均回收率为 99. 7% ，ＲSD 为 0. 6% 。

按“2. 2. 3”项条件下制备供试 品溶液 3 份，每份各进样 3 次，记录色谱图，求得舒 脑欣滴丸中藁本内酯的含量为 887. 16 μg /丸。 2. 3 F 检验 照上述供试品溶液制备方法制备舒脑欣滴丸样 品溶液 5 份，各吸取 1 μL 按“2. 1. 1”项下色谱条件 测定，各吸取 10 μL 按“2. 2. 1”项下色谱条件测定， 统计各方法测定项下藁本内酯峰面积，计算含量，利 用 F 检验分析两组数据之间的差异性，判断其差异 有无统计学意义。 查阅可知 F = S12 /S22 ( S1 ＞ S2) ，用实验测得的 两种含量数据方差代入 F 检验公式中，计算方差 比: F = 2. 99。F ＜ F0. 05，4，4 = 6. 39，结果表明，两组数据差异无统计学意义。

本次实验建立了气相色谱法测定舒脑欣滴丸中藁本内酯含量，对气相色谱条件进行优化，考察了检 测器温度 250℃、280℃、320℃，色谱柱温度 200℃、 210℃、220℃，结果发现温度对蒿本内酯影响很大， 提高检测器温度和色谱柱温度，藁本内酯峰与相邻 组分分离较好，达到基线分离，而且出峰时间适中， 峰型良好; 随着温度的升高，色谱峰会有所提前，节 省了实验时间，故检测器温度是 320℃，色谱柱温度 220℃。同时也建立了高效液相色谱法测定藁本内 酯含 量，查阅文献进行了流动相优化，考 察 了 0. 1% 、0. 2% 、1% 冰醋酸溶液，同时也对流动相的比 例进行了调整，适当的提高了有机相比例，使其出峰 快速，节省实验时间，并且根据分离效果、峰形效果， 最终选择甲醇︰ 0. 2% 冰醋酸水溶液( 75 ︰ 25) 。 利用 F 检验对两种方法测定的含量结果进行 了检验，其结果并无显著性差异，表明两种方法均可 作为舒脑欣滴丸中藁本内酯含量测定的方法，均能准确地测定出其含量，但液相在实际操作过程中较 之气相分析时间稍长。