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数控浴式超声仪得细胞生物学改变使用

返回列表 来源:未知 发布日期:2020-11-11 08:46【

材料与方法


CKX41 倒置荧光显微镜(Olympus); VICTOR X5 型 酶标仪(Biotek 公司);KQ⁃100DE 型 数控浴式超声仪(江苏省昆山市超声仪器有限公司);1⁃15K冷冻台式离心机(德国Sigma公司);流式 细胞仪FACS VantageTM(美国Becton Dickinson公司)。将细胞以每孔 5 × 103 个的密 度,接种于 96 孔板中,37 ℃、5% CO2 培养箱培养 24 h 后,加入含不同浓度雌激素(0、0.5、1、5、10、 100 nmol/L)培养基,每组设 5 个复孔。继续培养 24 h 后,弃旧培养基,每孔加入 10 μL 5 mg/mL 的 MTT 溶液和100 μL无血清DMEM/F12培养基,培养 箱中孵育 4 h。

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结果


使用不同浓度 的雌激素处理 MCF⁃10A 和 MCF⁃12A 细胞 24 h,结 果显示,0 ~ 10 nmol/L 的雌激素浓度可以促进细胞 的增殖,并且 5 nmol/L 为最佳促进浓度。 与空白组相比较,雌激素组中细胞的活性显著高,同时 8⁃OHdG 和 LDH 水平明显上升,即细胞毒性和 DNA 氧化损伤增高,但细 胞凋亡水平反而降低,差异均有统计 学意义(P < 0.01)。另外氧化应激是 DNA 损 伤的重要原因之一。而氧化酶能抑制氧化应激 清除产生的 ROS,保护细胞免受损伤。Nrf2 作 为细胞氧化应激反应的关键调控因子,调控 HO⁃1 和 NQO1 等氧化酶的表达,维持氧化还原稳态,消除致癌物质。本研究结果显示,雌激素可以 刺激 MCF⁃10A 和 MCF⁃12A 细胞增殖,并且在一定 浓度范围内随浓度增加,增殖效果越明显。同时 雌激素能增强正常乳腺细胞迁移和克隆能力,降 低细胞凋亡水平,与 YAN 等的研究结果相一致。 ANWESHA 等通过雌激素诱导细胞后发现 8⁃ OHdG 的表达水平明显增高,确定雌激素可诱导 DNA 的氧化损伤,本实验研究也有相一致的结 果。研究结果进一步发现,雌激素能够促进 ROS 在胞内积累和抑制 SOD、GPX、CAT 和 TAC 等氧化 酶的活性,并调控 Nrf2 及其下游 HO⁃1 和 NQO1 的 表达,引起氧化应激,诱导细胞 DNA 的氧化损伤。






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