巴尔喀什蘑菇的化学成分分析

新疆巴尔喀什蘑菇（Ａｇａｒｉｃｕｓｂａｌｃｈａｓｃｈｅｎｓｉｓ Ｓａｍｇｉｎａ＆ Ｇ．Ａ．Ｎａｍ）属 担 子 菌 亚 门（Ｂａｓｉｄｉｏ－ ｍｙｃｏｔｉｎａ），层 菌 纲 （Ｈｙｍｅｎｏｍｙｃｅｔｅｓ），伞 菌 目 （Ａｇａｒｉｃａｌｅｓ），蘑 菇 科 （Ａｇａｒｉｃａｃｅａｅ），蘑 菇 属 （Ａｇａｒｉｃｕｓ），俗称博 湖 蘑 菇、焉 耆 黑 蘑 菇、芦 苇 蘑菇等，属于中亚地区特有种，主要生长在内陆湖泊 沿岸，芦苇腐殖质丰富的沙滩上，常埋于沙层中。 据现有报道，国外仅在哈萨克斯坦有分布，国内目 前仅在新疆有分布，主要分布于博湖县海心山 和乌兰乡的芦苇滩上。

１ 材料与方法 

１．１ 试验材料 

野生巴尔喀什蘑菇，采集于新疆博湖 县 博 斯 腾湖芦苇滩。 硼酸、镁粉、碘、碘化钾、碘化铋钾、硅钨酸、磷 钨酸、磷钼酸、三 氯 化 铁、铁 氰 化 钾、α－萘 酚、三 氯 化铝、氢氧化钠、间二硝基苯、氢氧化钾、乙酸镁、 氢氧化钾、冰 乙 酸、盐 酸 羟 胺、亚硝酰铁氰化钠、 ３，５－二硝基苯甲酸、香草醛、氯化钠、溴酚蓝、硫酸 铜、茚三酮、酒石酸钾钠、正丁醇、三氯甲烷、醋酐、 甲酸、甲醇、无水乙醇、硝酸铝、浓盐酸、浓硫酸、浓 氨水、双氧水等均为分析纯，ＨＰＦｕｎｇａｌＤＮＡ Ｋｉｔ 试剂盒、２×ＴａｑＰＣＲ ＭａｓｅｒＭｉｘ （天 根 生 化 科 技 （北京）有限公司）。 ＪＸＦＳＴＰＲＰ－９６全自动样品快速研 磨 仪 （上 海净信科技）、ＭｅｔｔｌｅｒＴｏｌｅｄｏＡＢ２６５－Ｓ分析天平 （瑞士梅 特 勒－托 利 多 公 司）、ＯＳＢ－２１００ 旋 转 蒸 发 器（上海爱郎仪器有限公司）、恒温电加热套（北京 市永光明医疗仪器厂）、超声清洗器（昆山舒美超声仪器有限公司）、电热恒温水浴锅（上海博讯实业有限公司医疗设备厂），电热鼓风干燥箱（北京 市永光明医疗仪器厂） 

１．２ 试验方法 

１．２．１ 野生巴尔喀什蘑菇的分离纯化

 采用组织分离法进行分离纯化，选择 菇 盖 肥 厚，无病虫害的子实体作为分离材料，先将采集的 野生菇用无菌水清洗表面，再用７５％酒精表面消 毒，在菌 盖 与 菌 柄 交 接 处 取 ０．３～０．４ｃｍ３ 的 组 织，移放到ＰＤＡ 斜面培养基中央，置于２５℃恒温 培养 箱 内 培 养，定期观察菌丝生长情况，并 纯 化 保存。 

１．２．２ ＩＴＳ序列测定

 于博湖博 斯 腾 湖 芦 苇 滩 上 共 采 集 样 本 ３ 个 （ＢＨ０１～ＢＨ０３），对其进行全基因组 ＤＮＡ 提取。 对采集的子实体进行干燥处理，取一部分干燥子 实体，采用 Ｅｚｕｐ柱式真菌基因组 ＤＮＡ 抽提试剂 盒进行总 ＤＮＡ 的提取。 采用通 用 引 物 ＩＴＳ１：ＴＣＣＧＴＡＧＧＴＧＡＡＣ－ ＣＴＧＣＧＧ 和 ＩＴＳ４： ＴＣＣＴＣＣＧＣＴＴＡＴＴＧ－ ＧＡＴＡＴＧＣ（由 生 工 生 物 工 程 股 份 有 限 公 司 合 成）进行 ＰＣＲ 扩 增。ＰＣＲ 反 应 体 系：１０×Ｂｕｆｆｅｒ （ｗｉｔｈＭｇ２＋ ）２．５μＬ、ｄＮＴＰ１．０μＬ、酶０．２μＬ、 引物（１０μｍｏｌ·Ｌ－１）各０．５μＬ、模板０．５μＬ，无 菌双蒸水补足至２５μＬ。ＰＣＲ 扩增程序：９４ ℃预 变性４ｍｉｎ，９４℃变性４５ｓ，５５℃退火４５ｓ，７２℃ 延伸１ｍｉｎ，３０ 个 循 环，７２ ℃ 修 复 延 伸 １０ ｍｉｎ。 ＰＣＲ扩增产物用１．０％琼脂糖凝胶电泳检测，用 纯化试剂盒（天根生化科技（北京）有限公司）进行 纯化。 将纯 化 后 ＰＣＲ 产 物 交 于 生 工 生 物 工 程（上 海）股份有限公司进行克隆测序。测序结果利用 ＤＮＡｓｔａｒ软件进行 拼 接，后 提 交 至 ＮＣＢＩ核 酸 数 据库（ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／），进 行 ＢＬＡＳＴ 比对分析。选取同源性较高的序列进行系统进化 分析，利用 ＭＥＧＡ６．０软件首先进行多重序列比 对，再 采 用 Ｎｅｉｇｈｂｏｕｒ－ｊｏｉｎｉｎｇ 法 构 建 系 统 发 育 树，进行１０００次 Ｂｏｏｔｓｔｒａｐ自举法检验。 

１．２．３ 系统化学预试验溶液的制备 

水浸液：称取巴尔喀什菇子实体粗粉１０ｇ，置 于２５０ｍＬ 的三角烧瓶中，加蒸馏水８０～１００ｍＬ 室温浸泡过 滤。过 滤 出 约２０ｍＬ 滤 液 供 检 测 氨基酸、多肽、蛋白质等成分用。

２ 结果与分析

野生巴尔喀什蘑菇群生或散生，子实体个体 一般较大，埋于沙土之下。菌盖表面光滑，生长初 期呈 半 球 形，成 熟 后 逐 渐 平 展；菌 褶 致 密 且 不 等 长，生长初期为污白色，后逐渐变为淡粉色、褐色、 黑褐色，最后呈黑色；菌柄中生，短粗，上部近圆柱 形，基部略膨大；菌环位于菌柄上部，膜质呈乳白 色，易脱落；菌肉致密厚实，用刀切开，颜色变化为 白色、淡粉色、淡红色、红褐色、褐色，最后呈淡黑 褐色；另 外，其孢子印呈红褐色至黑褐色。 于 ＰＤＡ 培养基上培养巴尔喀什蘑菇，菌 落 呈 白 色， 菌丝浓密，气生菌丝较旺盛，见图１。经新疆农业 大学赵震宇教授根据形态特征及显微结构鉴定为 巴尔喀什蘑菇（ＡｇａｒｉｃｕｓｂａｌｃｈａｓｃｈｅｎｓｉｓＳａｍｇｉｎａ ＆ Ｇ．Ａ．Ｎａｍ）。

３ 结论与讨论

 巴尔喀什蘑菇是新疆特有的一种美味食用 菌，食用历史悠久，深受当地民众的喜爱。其曾被 定名 为 圆 孢 蘑 菇 （Ａｇａｒｉｃｕｓｇｅｎｎａｄｉｉ （Ｃｈｏｔ．ｅｔＢｏｕｄ．）Ｏｒｔｏｎ），后１９８９年经赵 震 宇 教 授 与 哈 萨 克斯坦国科学院植物研究所标本室核对标本，命 名为 巴 尔 喀 什 蘑 菇 （Ａｇａｒｉｃｕｓｂａｌｃｈａｓｃｈｅｎｓｉｓ Ｓａｍｇｉｎａ：Ｇ．Ａ．Ｎａｍ）。该研究以采自博斯腾 湖的野生蘑 菇 为 试 验 材 料，采 用 形 态 学 和ｒＤＮＡ ＩＴＳ序列对其进行 分 子 鉴 定，明 确 其 为 巴 尔 喀 什 蘑菇。并采用系统化学预试法对其子实体中的化 学成分进行初步测定，结果显示，野生巴尔喀什蘑 菇子实体中含有氨基酸、多肽、蛋白质、还原糖、多 糖、苷类、皂苷类、有机酸、酚类、鞣 质 类、甾 体 类、 三萜类、黄酮类、内酯类、挥发油类等化学成分，证 明其营养 成 分 丰 富，具 有 开 发 价 值。

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