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浅谈超声清洗器在自由基清除活性研究的使用

返回列表 来源:未知 发布日期:2019-09-17 10:40【

五味子为木兰科植物五味子〔Schisandra chinensis (Turcz.) Baill.〕干燥成熟的果实,在《神农本草经》中被列为上品中药,味酸、性甘温,具有敛肺、滋肾、生津、收 汗、涩精之功效。五味子属于多年生藤本植物,可用于生产药品、保健品、饮品及化妆品等。五味子中含 有多种化学成分,如挥发性成分、木质素类、有机酸类、 糖类等。早期相关研究主要集中在木脂素等脂溶性 成分。现代医学研究表明,五味子多糖具有抗疲劳、 抗焦虑、抗变态、保护肝损伤、保护肠道及清除自由基等 多种生理活性,有重要的研究意义和开发利用价值。

1 材料、试剂与仪器

1.1 材料与试剂

五味子,采收于吉林省集安市,经中国农业科学院 特产研究所许世泉研究员鉴定为木兰科植物北五味子 〔S. chinensis (Turcz.) Baill.〕的果实;单糖标准品葡萄糖 (Glc)、鼠李糖(Rha)、半乳糖(Gal)、半乳糖醛酸(GalA)、 阿拉伯糖(Ara)、葡萄糖醛酸(GlcA)、甘露糖(Man)(Sigma-Aldrich 公司);DPPH(Cat# CD4891-500MG,Coolaber 公司);1-苯基-3 甲基-5-吡唑酮(PMP)、盐酸-甲醇 标准溶液(源叶生物公司);维生素 C(VC)(天津市光 复精细化工研究所);去离子水,由特种经济动植物加 工实验室自制;其他试剂均为国产分析纯。

1.2 仪器

QD8J(BL)单煎机(青岛达尔电子机械销售有限 公司);TGL-16A高速台式离心机(上海安亭科学仪器 厂);FD-1A-50 低温冷冻干燥机(北京博医康技术有限 公司);昆山舒美KQ-500DE超声波清洗机
;HHS型电热恒温水浴锅(上海博讯实业有限公司医疗设备厂);高效液相色谱仪、LC-16 溶剂 输送泵、CTO-16 柱温箱、SPD-M20A 紫外检测器 (日本岛津仪器有限公司);Hypersil ODS2 C18 色谱柱 (4.6 mm×250 mm,5 m)(大连依利特分析仪器有限公 司);721G可见分光光度计(上海仪电分析仪器有限公 司);WP-UP-WF-40微量分析型超纯水机(四川沃特尔 水处理设备有限公司)。


2 方法

2.1 五味子总多糖的提取

选用干燥的北五味子 500 g,加入 5 L 去离子水,使用单煎机 100 ℃提取 2 h,4 层纱布过滤,残渣重复 提取 3 次,合并滤液,使用电磁炉保持微沸状态浓缩滤 液至 1 L,放至室温,离心(4 500 r/min,10 min),弃去沉 淀。向上清液中加入医用酒精,调节乙醇终浓度为 80%,沉淀过夜,离心(4 500 r/min,10 min),收集沉淀。 向沉淀中加入 800 mL 蒸馏水,充分溶解,重复醇沉 1 次。沉淀用蒸馏水复溶后冷冻干燥,得五味子总多糖 (Water-soluble S. chinensis polysaccharides ,WSP)。

3 结果与分析

五味子多糖产率为 5.2%。通过 HPLC 分析单糖 组成,结果表明,WSP 主要由 GalA 组成 (70.3%),其余还有 Glc(11.1%)和 Gal(7.8%)等; WSP-30 主要是 GalA(96.2%)组成;WSP-60 主要由 GalA(83.8%)组成,此外还含有少量的 Rha(4.0%)、 Ga(l 6.5%)、Glc(3.2%)和Man(2.4%);WSP-80主要由 GalA(45.7%)和 Glc(26.8%)组成。WSP-30、WSP-60 和 WSP-80 中均含有丰富的 GalA,其中,WSP-30 中 GalA 含量更是高达 96.2%。GalA 是一种果胶类物质 的主要成分,分子量较大,在乙醇中的溶解度小,低浓 度乙醇易使其沉淀,GalA 在 WSP-30、WSP-60、 WSP-80 中的含量依次降低。IC50 值也是表示抗氧化能力的一个指标,IC50 值 越低,抗氧化剂的自由基清除能力越强。WSP-30 的 DPPH 自由基清除能力最强,IC50 值为 0.101 mg/mL; 其次为阳性对照Vc、WSP,IC50值分别为0.163 mg/mL、 0.173 mg/mL;WSP-80、WSP-60 的 IC50 值分别为 0.525 mg/mL、1.946 mg/mL。

4 讨论

果胶是多糖的一种,在许多植物中含量丰富,具有 多种活性。GalA为果胶的标志性组分,通常认为,GalA 含量超过65%的多糖可称为果胶,因此,WSP、WSP-30 与 WSP-60 均属于不可多得的天然果胶类物质,尤其 是 WSP-30。许多果胶可作为增稠剂、稳定剂等应用 于食品工业中,或作为一种水溶性膳食纤维应用于保 健食品和药品中。对WSP 及其子级分的甲酯化度、 凝胶特性等进行研究和分析,可以为五味子多糖的应 用提供基础,也是课题组下一步工作的重点。尿病、自身免疫性疾病等。自由基氧化应激反应对许 多生物大分子均有损伤作用,最常见的是对蛋白质和 DNA 的破坏。




 


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